前言:
氯霉素類抗生素可作用于細菌核糖核蛋白體的50S亞基,而阻撓蛋白質的合成,屬抑菌性廣譜抗生素,能夠用于人體某些疾病的治療,以及作為獸藥用于防范及治療動物疾病。在日常生活中氯霉素等激素類藥物會廣泛應用于養(yǎng)殖業(yè),例如魚、蝦等水產類食品,養(yǎng)殖戶為了所養(yǎng)殖的魚、蝦能夠快速生長,并且不生病,會放很多抗生素類藥物到養(yǎng)殖的水中,從而造成藥物在動物體內及動物體表富集,而人類食用這些肉類會使獸藥殘留進入人體,從而影響身體健康。
本文參照《GB 31658.2-2021 食品安全國家標準 動物性食品中氯霉素殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》,利用EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL,貨號:PZ10304)進行凈化,再用高效液相色譜串聯質譜檢測進行檢測,建立了一種對水產品中氯霉素的分析方法。
關鍵詞:
水產品,氯霉素,固相萃取,
1, 實驗過程
1.1 儀器與試劑
SPE1000 全自動固相萃取系統,北京萊伯泰科儀器股份有限公司;
M64高通量平行濃縮儀,北京萊伯泰科儀器股份有限公司;
4500質譜系統,SCIEX公司;
EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL,貨號:PZ10304),北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
冷凍離心機,GL-20G-Ⅱ,上海安亭科學儀器廠 ;
甲醇(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
乙腈(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
正己烷(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
乙酸乙酯(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
氯化鈉(分析純),購自國藥集團化學試劑有限公司。
1.2 工作液配制
氯霉素標準儲備液:100μg/mL,溶劑為甲醇,購自壇墨質檢標準物質中心 。
氯霉素-D5標準儲備液:100μg/mL,溶劑為甲醇,購自壇墨質檢標準物質中心 。
標準中間液:移取氯霉素儲備液和氯霉素-D5標準儲備液各0.1mL,分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為1.0μg/mL的氯霉素標準中間液及氯霉素-D5同位素標準中間液。
標準使用液:移取氯霉素中間液和氯霉素-D5標準中間液各1mL,分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為0.1μg/mL的氯霉素標準使用液及氯霉素-D5同位素標準使用液。
分別移取0.1μg/mL的氯霉素標準使用液0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mL分別置于10mL容量瓶中并加入氯霉素-D5同位素標準使用液0.2 mL以純水定容至刻度,標準濃度為0 μg/L、0.1 μg/L、0.5 μg/L、1 μg/L、2μg/L、5μg/L, 氯霉素-D5濃度固定為2μg/L。
1.3 實驗部分
1.3.1 樣品制備
取魚肉5g,加氯霉素-D5同位素標準使用液0.2 mL、乙腈5mL、4%氯化鈉溶液5mL,渦旋振蕩2min,4000r/min離心10min,取上清液,殘渣重復提取1次,合并上清液。加正己烷5mL,渦旋振蕩1min,2000r/min離心10min,棄去上層液,正己烷重復處理1次。加水飽和的乙酸乙酯溶液5mL,渦旋振蕩1min,2000r/min離心10min,上層液轉移到20mL上樣瓶中,重復提取1次,合并提取液,氮氣吹干,加3mL5%乙腈水溶液溶解,混勻,備用待凈化。
1.3.2 固相萃取凈化
EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL,貨號:PZ10304)用10mL甲醇、10mL水依次進行活化,取1.3.1待凈化液上樣,上樣結束后用3mL、3mL水淋洗萃取柱,再用4mL 50%甲醇水溶液洗脫萃取柱,收集洗脫液,加水飽和乙酸乙酯4mL,渦旋振蕩1min,2000r/min離心5min,取上層液,重復處理1次,合并上層溶液,氮氣吹至近干干。加1mL 50%甲醇水溶液溶解,混勻過微孔濾膜后供LC-MS/MS測定。
1.3.3 LC-MS/MS儀器條件
色譜柱:Shim-pack Velox C18(2.7μm,2.1*100mm);
檢測方式:多反應監(jiān)測(MRM);
流動相:A:水-B: 甲醇(50:50);
流速:0.2mL/min;
進樣量:1μL;
2, 實驗結果
圖1 標液色譜圖
圖2氯霉素標準曲線圖
3, 結論
本次實驗展示了使用EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL,貨號:PZ10304)對水產品中氯霉素進行凈化,通過高效液相色譜串聯質譜進行測定,其加標回收率在84.7%~105.2%之間,RSD在8.1%,能夠滿足標準要求。說明EZsepTMC18固相萃取柱(1000 mg/6mL,貨號:PZ10304)能很好的完成方法中的凈化工作,并且結果穩(wěn)定、可靠。
4, 參考文獻
1. 《GB 31658.2-2021 食品安全國家標準 動物性食品中氯霉素殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》